實驗原理:
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測豬BAFF。預先包被BAFF特異性捕獲抗體的微孔板與樣本中的BAFF結合，再加入生物素標記的檢測抗體形成夾心復合物，最后通過辣根過氧化物酶（HRP）標記的親和素催化TMB顯色，顏色深淺與樣本中BAFF濃度成正比。
結果的計算：
計算標準品和樣本復孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標準曲線（作圖時去掉空白組的值）或者使用能夠生成四參數(shù)邏輯（4-P）曲線擬合的計算機軟件來創(chuàng)建標準曲線。若樣品OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應的稀釋倍數(shù)。
典型數(shù)據(jù)及參考曲線：
以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實驗者需根據(jù)自己的實驗數(shù)據(jù)建立標準曲線。
| 校準品濃度(ng/mL) | 10.00 | 5.00 | 2.50 | 1.25 | 0.63 | 0.31 | 0.16 | 0.00 |
| OD450/630值 | 2.698 | 1.580 | 0.850 | 0.498 | 0.355 | 0.171 | 0.091 | 0.034 |
| 校正OD值 | 2.664 | 1.546 | 0.816 | 0.465 | 0.321 | 0.137 | 0.057 | 0.000 |
本圖所示標準曲線僅供示例，結果計算應以同次試驗標準品所繪標準曲線為準計算樣本結果
靈敏度：
經(jīng)樣本測試，本試劑盒的檢測靈敏度為 0.078ng/mL
特異性：
可檢測樣本中的BAFF ，且與其它類似物無明顯交叉反應
檢測范圍：
本試劑盒的檢測范圍為：0.156ng/mL-10ng/mL
樣本檢測：
血清，血漿，細胞培養(yǎng)上清及其他生物學樣本
樣本處理：
1. 血清樣本
室溫靜置2小時或4℃過夜后，1000×g離心20分鐘
取上清，-20℃或-80℃保存（避免反復凍融）
2. 血漿樣本
用EDTA或肝素抗凝，采集后30分鐘內2-8℃ 1000×g離心15分鐘
取上清，保存條件同血清
3. 組織勻漿
用預冷PBS沖洗組織，按1:9重量體積比加入PBS（含蛋白酶抑制劑）
冰上勻漿后離心取上清
4. 細胞裂解液
推薦使用非變性裂解緩沖液（避免化學裂解液干擾）
檢測實驗的局限性：
本試劑盒僅供科研使用，不能用于臨床診斷或治療。
1. 試劑盒的使用期限不得超過試劑盒標簽上的有效期。不要將試劑與其他批次或來源的試劑混合使用或替換使用。
2. 如果樣品產生的值高于最高標準，則用測定稀釋劑進一步稀釋樣品，并重復測定。稀釋劑、實驗員、移液技術、洗滌技術、培養(yǎng)時間或溫度以及試劑盒使用年限的任何變化都可能導致結果變化。
3. 樣本采集、處理和存儲的變化可能會導致樣本值的差異。
4. 本試劑盒實驗設計消除了不同生物樣品中可能潛在的干擾因素的影響，但并不能涵蓋所有潛在影響因素。不能排除存在其他干擾的可能性。
操作要點及注意事項：
1. 混合蛋白質溶液時，應始終避免起泡。為了避免交叉污染，在添加每個標準品、樣品和試劑時應更換移液器槍頭。此外，每種試劑應單獨使用容器。
2. 確保試劑不間斷地添加到板孔中。為了確保準確的結果，在孵育步驟中需要粘合好封板膜。
3. 當使用自動洗板機時，在加入洗滌緩沖液后加入30秒的浸泡期，或者在洗滌步驟之間將板旋轉180度，可以提高測定精度。
4. 顯色劑應保持無色，直到添加到板中。確保顯色劑不受光線照射。顯色劑應從無色變?yōu)樗{色。
5. 應按照與顯色劑相同的順序將終止液添加到板中。加入終止液后，孔中形成的顏色將從藍色變?yōu)辄S色。綠色的孔表示終止液未與基質溶液充分混合。
6. 此試劑盒提供的終止液為稀硫酸溶液，具有一定腐蝕性，應謹慎操作。
7. 該試劑盒中的某些成分含有防腐劑，可能會引起皮膚過敏反應，應佩帶口罩避免吸入薄霧。
8. 顯色劑B可能會引起皮膚、眼睛和呼吸道刺激，應佩帶口罩避免吸入薄霧。
9. 佩戴防護手套、防護服、眼睛和面部防護用品。處理后徹底洗手。
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資料/datasheet
